蛋白提取試劑盒的使用方法

更新時(shí)間：2023-02-10

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　　本試劑盒提供全套試劑，適用于從各種哺乳動(dòng)物細(xì)胞（原代或傳代細(xì)胞、貼壁或懸浮細(xì)胞等）和各種實(shí)體軟組織（如腦、脊髓、神經(jīng)結(jié)或纖維、脂肪、肝臟、消化道、腎臟、心臟、肌肉、血管、結(jié)締組織）提取總蛋白。提取過程簡(jiǎn)單方便，無須超速離心機(jī)。本試劑盒含有的du特變性劑能夠溶解細(xì)胞膜包括細(xì)胞質(zhì)膜和核膜。提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫共沉淀等蛋白研究。

　　使用方法：

　　A. 細(xì)胞總蛋白提取

　　1. 每500 μl裂解液，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入5 μl PMSF，使PMSF的最終濃度為1mM。

　　2. 取5-10×106個(gè)細(xì)胞，在4℃，500 g條件下離心5-10分鐘，小心吸取培養(yǎng)基，盡可能吸干，收集細(xì)胞。

　　3. 用冷PBS洗滌細(xì)胞兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。

　　4. 每5×106個(gè)細(xì)胞中加入500 μl冷的裂解液，混勻后，在4℃條件下振蕩15-20分鐘。

　　5. 在4℃，16,000 g條件下離心15分鐘。

　　6. 快速將上清轉(zhuǎn)移至另一預(yù)冷的干凈離心管，即可得到總蛋白。

　　B. 組織總蛋白提取

　　1. 每500 μl裂解液，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入5 μl PMSF，使PMSF的最終濃度為1mM。

　　2. 取100 mg組織樣本剪碎，加入裂解液，用組織勻漿器勻漿至無明顯肉眼可見固體。

　　3. 將組織勻漿吸入另一預(yù)冷的干凈離心管中，在4℃，16000 g條件下離心5分鐘。